在少許微底棲生物試驗(yàn)室大概須要無(wú)菌操縱的場(chǎng)合，想領(lǐng)會(huì)滅菌的簡(jiǎn)直功效就須要底棲生物引導(dǎo)物的扶助。常常滅菌指的是用物理或化學(xué)的辦法將目的微底棲生物十足殺滅，使之到達(dá)無(wú)菌保護(hù)程度，普遍最常用的有化學(xué)試藥、射線、濕熱、干熱以及過(guò)濾等除菌本領(lǐng)。對(duì)準(zhǔn)各別的微底棲生物沿用的本領(lǐng)也不一律。而想要考證那些本領(lǐng)的功效，就須要少許具備滅菌耐受力的活微底棲生物動(dòng)作引導(dǎo)物來(lái)舉行確定。

即日咱們要講的枯草芽孢桿菌玄色變種重要用來(lái)各類調(diào)理組織及制藥產(chǎn)業(yè)范圍的殺菌功效考證中，其道理是過(guò)程滅菌處治后含有枯草芽孢桿菌玄色變種的水樣在經(jīng)過(guò)孔徑為0.45um的濾膜后，細(xì)菌和芽孢被扣留在濾膜上，而后將濾膜置于酪氨酸瓊脂培植基上，36℃±1℃培植72h-96h，枯草芽孢桿菌玄色變種爆發(fā)的酪氨酸酶可領(lǐng)會(huì)并運(yùn)用酪氨酸產(chǎn)生玄色素，爆發(fā)玄色的特性菌落。對(duì)特性菌落舉行染色內(nèi)窺鏡檢查后經(jīng)過(guò)生物化學(xué)考查做進(jìn)一步審定，能運(yùn)用硝化甘油和甘霖糖，可恢復(fù)王水鹽和水解小粉，不許運(yùn)用苦杏仁苷和甘霖醇，并確覺得革蘭氏陰性芽孢桿菌的特性菌落為枯草芽孢桿菌玄色變種，審定截止為陰性。

檢驗(yàn)和測(cè)定所用試藥1.酪氨酸瓊脂培植基。

2.養(yǎng)分瓊脂培植基。

3.小粉培植基和碘液。

4.王水鹽恢復(fù)培植基和關(guān)系試藥。

5.硝化甘油復(fù)紅肉湯培植基。

6.甘霖糖生物化學(xué)培植基。

7.甘霖醇生物化學(xué)培植基。

8.苦杏仁苷生物化學(xué)培植基。

9.革蘭氏染色液。

10.芽孢染色液。

11.陰性比較菌：如芽孢芽孢桿菌。

12.陰性比較菌：枯草芽孢桿菌玄色變種。

13.枯草芽孢桿菌玄色變種芽孢懸液

依照《殺菌本領(lǐng)典型》的規(guī)則制備，也可購(gòu)置濃淡范疇在106CFU/ml-109CFU/ml之間的市場(chǎng)銷售枯草芽孢桿菌玄色變種芽孢懸液。

14.無(wú)菌濾膜：直徑50mm，孔徑0.45μm的乙酸纖維濾膜。

按無(wú)菌操縱訴求包扎，經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌20min，晾干備用；或?qū)V膜放入高腳杯中，介入試驗(yàn)用水，煮沸滅菌3次，15min/次，前2次煮沸后需換水清洗2-3次。也可沿用市場(chǎng)銷售的無(wú)菌濾膜。

15.白臘質(zhì)封口膜。

16.無(wú)菌水：取過(guò)量試驗(yàn)級(jí)純水，經(jīng)121 ℃高壓蒸汽滅菌20 min，備用。

檢驗(yàn)和測(cè)定所需試藥1.樣本瓶：螺口帶蓋或磨口具塞的250ml、500ml廣口玻璃瓶。

2.常溫培植箱：36℃±1℃。

3.高壓蒸汽滅菌器：121℃，可調(diào)。

4.pH計(jì)：精確到0.1pH單元或更高精度。也可運(yùn)用pH精細(xì)試紙。

5.顯微鏡：物鏡4×或5×、10×、20×、40×，油鏡100×，目鏡10×或15×。

6.領(lǐng)會(huì)天平：本質(zhì)分度值0.0001g。

7.培植皿：直徑90mm。

8.過(guò)濾安裝：配有砂芯濾器、圓筒形玻璃漏子和真空泵，抽濾壓力不低于-50kPa。

9.育種環(huán)：直徑1mm-3mm。

10.鑷子：不銹鋼或一次性無(wú)菌塑料鑷子。

11.刻度移液管：1ml、10ml。也可運(yùn)用可調(diào)式移液器。

12.量筒：100ml。

13.圓錐形瓶：100ml。

14.乙醇燈。

15.滴定管：10ml。

16.無(wú)菌操縱擺設(shè)：無(wú)菌室、超凈處事臺(tái)、底棲生物安定柜。

17.普遍試驗(yàn)室常用儀器和擺設(shè)。

水樣搜集評(píng)介運(yùn)用高溫高壓滅菌擺設(shè)的滅菌功效時(shí)，取樣本瓶，介入枯草芽孢桿菌玄色變種芽孢懸液及200ml無(wú)菌水使攙和液中枯草芽孢桿菌玄色變種芽孢終濃淡到達(dá)5×104CFU/ml-5×105CFU/ml。滅菌處治結(jié)束后，掏出樣本瓶，對(duì)水樣舉行滅菌底棲生物引導(dǎo)物（枯草芽孢桿菌玄色變種）的檢驗(yàn)和測(cè)定。

評(píng)介運(yùn)用其它滅菌擺設(shè)的滅菌功效時(shí)，滅菌前取過(guò)量枯草芽孢桿菌玄色變種芽孢懸液介入滅菌擺設(shè)，使水樣中枯草芽孢桿菌玄色變種芽孢終濃淡到達(dá)5×104CFU/ml-5×105CFU/ml。滅菌處治結(jié)束后，從滅菌擺設(shè)中搜集水樣，舉行滅菌底棲生物引導(dǎo)物（枯草芽孢桿菌玄色變種）的檢驗(yàn)和測(cè)定。采集樣品量普遍為樣本瓶含量的80%安排，不得用樣本清洗樣本瓶。樣本搜集結(jié)束后，趕快用無(wú)菌包裝紙包扎樣本瓶。

樣本搜集后宜在2h內(nèi)檢驗(yàn)和測(cè)定，要不應(yīng)在10℃以次冷藏生存輸送，但不得勝過(guò)6h。試驗(yàn)室接受樣本后，不許登時(shí)發(fā)展檢驗(yàn)和測(cè)定的，樣本應(yīng)在4℃以次冷藏生存，并在2h內(nèi)檢驗(yàn)和測(cè)定。

水樣過(guò)濾用無(wú)菌鑷子以無(wú)菌操縱夾取無(wú)菌濾膜貼放在已滅菌的過(guò)濾安裝上，恒定好過(guò)濾安裝。將樣本充溢混勻后取100 ml 抽濾，以無(wú)菌水清洗濾器內(nèi)壁2-3 次。樣本過(guò)濾實(shí)行后，再抽氣約5s，關(guān)上電門。過(guò)濾前依照無(wú)菌操縱訴求安排樣本的pH值至7.0-8.0。

培植過(guò)程用滅菌鑷子夾取濾膜移放在酪氨酸瓊脂培植基上，濾膜扣留細(xì)菌面進(jìn)取，濾膜應(yīng)與培植基實(shí)足貼緊，兩者間不得留有氣泡，而后用白臘質(zhì)封口膜封好培植皿，顛倒培植皿，放入常溫培植箱內(nèi)，36℃±1℃培植72h-96h。

培植96h后，如培植基上未有菌落成長(zhǎng)，則考查中斷；如培植基上有菌落成長(zhǎng)，則挑取玄色的特性菌落于養(yǎng)分瓊脂培植基上，36℃±1℃培植24h，待審定。同聲將已挑菌落的酪氨酸瓊脂培植基培植皿積聚于2℃-5℃，以備需要時(shí)復(fù)查。

染色內(nèi)窺鏡檢查挑取玄色或疑惑菌落，辨別運(yùn)用革蘭氏染色液和芽孢染色液染色，枯草芽孢桿菌玄色變種革蘭氏染色內(nèi)窺鏡檢查以及芽孢染色內(nèi)窺鏡檢查不妨參考關(guān)系內(nèi)窺鏡檢查圖，枯草芽孢桿菌玄色變種為革蘭氏陰性菌，養(yǎng)分細(xì)胞呈桿狀，單個(gè)或呈短鏈狀陳設(shè)。

生物化學(xué)試驗(yàn)挑取玄色或疑惑菌落，辨別育種到小粉培植基、王水鹽恢復(fù)培植基、硝化甘油復(fù)紅肉湯培植基、甘霖糖生物化學(xué)培植基、甘霖醇生物化學(xué)培植基和苦杏仁苷生物化學(xué)培植基上。

空缺比較試驗(yàn)用無(wú)菌水依照過(guò)濾和培植辦法舉行操縱；培植96h后枯燥培植基上應(yīng)無(wú)菌落成長(zhǎng)，要不，該次樣本審定截止失效，應(yīng)查明因?yàn)楹髲男虏杉瘶悠泛蜋z驗(yàn)和測(cè)定。

陰性及陰性比較將陰性比較菌和陰性比較菌制成濃淡為40CFU/L-600CFU/L的菌懸液，辨別依照過(guò)濾、培植、試驗(yàn)的辦法操縱。陰性、陰性比較菌表露的生物化學(xué)反饋截止應(yīng)與參照表所列截止普遍，要不該次水樣審定截止失效，此時(shí)查明因?yàn)楹髲男虏杉瘶悠泛蜋z驗(yàn)和測(cè)定。

截止確定100ml水樣中檢出枯草芽孢桿菌玄色變種，即可確定滅菌不對(duì)格；而即使在100mL水樣中未檢出枯草芽孢桿菌玄色變種，可評(píng)介為滅菌及格。

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