【試驗道理】

流式細胞儀(FCM)是八十歲月集單克隆抗原、熒光化學、激光、計劃機等高本領興盛起來的一種進步儀器，已普遍運用于免疫性學、生去世學、底棲生物學、腫瘤學以及血液學等上面的接洽和臨床慣例處事。個中檢驗和測定人白細胞外表標記可獨白血病、淋巴液瘤效率趕快精確的確診，對淋巴液細胞群和亞群舉行透徹分門別類，還能辨別純化某一群或亞群細胞?；罴毎庖咝詿晒獗绢I是用來FCM檢驗和測定的標本籌備，染色后也能在熒光顯微鏡下舉行查看，在某些試驗前提下，活細胞免疫性熒光染色后的奇異性和敏銳性要優(yōu)于滴片恒定的慣例轉彎抹角免疫性熒光的截止。

活細胞外表保持有較完備的抗原或受體，先用奇異性鼠源性單克隆抗原與細胞外表相映抗原貫串，再用熒光標志的第二抗原貫串，按照所測定的熒光強度和陰性百分率即可知相映抗原的密度和散布。

【本領與操縱】

（1）制備活性高的細胞懸液(培植細胞系、外周血單個核細胞、胸腺細胞、脾細胞等均可用來本法)。

（2）用10％FCS　RPMI1640安排細胞濃淡為5×10６～１×10７／ml。

（3）取40μl細胞懸液介入預先有奇異性McAb(5～50μl)的小玻璃管或塑料離心管，再加50μl 1∶20(用DPBS稀釋)滅活平常兔血小板，4℃ 30min。

用清洗液清洗2次，歷次加清洗液2ml安排，1000rpm×5min。

（4）棄上清，介入50μl處事濃淡的羊抗鼠(或兔抗鼠)熒光標志物，充溢振搖，4℃ 30min。用清洗液清洗2次，歷次加液2ml安排，1000rpm×5min。

（5）加過量恒定液(如為FCM制備標本，普遍介入1ml恒定液，如制片后在熒光顯微鏡下查看，視細胞濃淡介入100～500μl恒定液)。

（6）FCM檢驗和測定或制片后熒光顯微鏡下查看(標本在滴定管中可生存5～7天)。

【提防事變】

（1）所有操縱在4℃下舉行，清洗液中加有比慣例防腐劑量高10倍的NaN３，上述試驗前提是提防一抗貫串細胞膜抗原后爆發(fā)交聯(lián)、零落。

（2）清洗要充溢，以制止游離抗原封鎖二抗與細胞膜上一抗相貫串，展示假陰性。

（3）加過量平常兔血小板可封鎖某些細胞外表免疫性球卵白Fc受體，貶低和提防非奇異性染色。

（4）細胞活性要好，要不易爆發(fā)非奇異性熒光染色。

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